微生物检测用洁净室与无菌操作室应该满足什么要求

所有无菌检查和微生物限度检查的操作都必须在严格控制微生物污染的环境下进行。操作环境的无菌保证程度将直接影响无菌检查结果。为确保无菌检查使用的洁净室（区）环境的稳定性，以及检查结果的可靠性，必须采取合理的控制措施和评价方法来控制和评估洁净室（区）的环境质量。无菌检查和微生物限度检查应在环境洁净度为10000级和局部洁净度为100级的单向流空气区域内或者隔离系统中进行。整个过程必须严格遵守无菌操作，以防止微生物污染的发生。单向流空气区、工作台面和环境应定期按照目前的国家标准《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》进行洁净度验证。隔离系统应按照相关要求进行验证，其内部环境的洁净度应符合无菌检查的要求。

无菌室应具备良好的采光条件，避免潮湿，并远离厕所和污染区。无菌室的面积一般不超过10平方米，并且不小于5平方米；高度不超过2.4米。无菌室由1至2个缓冲间和操作间组成，操作间和缓冲间的门应呈角度，不直对。操作间和缓冲间之间应该有能进行灭菌功能的样品传递箱。缓冲间内应该设有洗手盆、毛巾、无菌服装的架子和挂钩以及拖鞋等，不应存放培养箱和其他杂物。无菌室的墙壁应该光滑平整，能够经受清洗和消毒。墙壁与地面、天花板的连接处应该呈凹弧形，没有缝隙，没有死角。操作间内不应该安装下水道。

无菌操作室应满足以下要求：

配备空气过滤装置，确保单向流的空气除菌；操作区洁净度达到100级或同等级别的超净工作台；室内温度控制在18~26℃之间；相对湿度保持在45%~65%。缓冲间和操作室内都应设置能进行空气消毒的紫外线灯或其他适当的消毒设备。不同洁净级别的相邻房间之间的静压差应不低于5Pa，无菌室（区）与室外大气之间的静压差应不低于10Pa。无菌室内的照明灯应安装在天花板内，确保室内光照均匀，光照度不低于300lx。缓冲间和操作室设置的紫外线杀菌灯（2~2.5W/平方米）应定期检查辐射强度，要求在操作面上达到40/μW/平方厘米，如有不符合要求的紫外杀菌灯应及时更换。

每周以及每次进行操作前，应该用0.1%的新洁尔灭或2%的甲酚液或其他适当的消毒液来擦拭工作台和可能被污染的角落。同时，应该打开无菌空气过滤器并使用紫外灯进行1小时的杀菌。在每次操作完成后，同样应该使用上述消毒溶液擦拭工作台面，排除室内湿气，并使用紫外灯进行半小时的杀菌。

对无菌室的洁净度进行检查是指在对无菌室进行消毒处理后、进行无菌试验前以及操作过程中，需要检测空气中的菌落数目，以此来判断无菌室是否达到规定的洁净程度。常用的方法有沉降菌和浮游菌的测定。

沉降菌的检测方法和标准：

使用无菌的方式将三个营养琼脂平板带入无菌操作室，将它们分别放在操作区台面的左侧、中间和右侧；打开盘的盖子，让平板暴露在空气中30分钟后，再将盖子盖好，放在温度为32.5℃±2.5℃的环境中培养48小时，之后取出进行检查，三个平板上生长的菌落数量平均不得超过一个。

浮游菌检测的方法和标准：使用专门的采样器，最好选择基于撞击法原理的采样器，一般使用狭缝式或离心式采样器，并配备流量计和定时器。操作时要严格按照仪器说明书的要求，并定期进行校验。在采样器和培养皿进入被测试的房间之前，先用消毒剂对消毒室进行灭菌处理。使用的培养基可以选择营养琼脂培养基或其他经药典认可的培养基。在使用时，首先启动真空泵进行抽气，抽气时间不得少于5分钟，然后调节流量、转盘和转速。关闭真空泵后，将培养皿放入，盖上采样器盖子后再适当调节缝隙高度。将采样口放置在采样点后，依次打开采样器、真空泵，启动定时器，并根据采样量设定采样时间。当全部采样完成后，将培养皿放置在32.5℃±2.5℃的培养条件下培养48小时，然后取出进行检查，浮游菌的个数平均值不得超过每平方米5个。

为了进行对照培养，每次都应该选择3个培养皿来作为培养基的标准。

无菌操作台面或超净工作台还需定期邀请相关部门进行检测，以检测其悬浮粒子的水平。检测结果应达到100级别（通常使用尘埃粒子计数仪进行测量）。在检测粒径大于等于0.5微米的尘埃粒子数量时，测量结果不得超过每升空气3.5个；而对于大于等于5微米的尘埃粒子数量，测量结果应为0个。此外，空气流速应保持在不低于0.35米/秒的水平，并在必要时更换过滤器以确保无菌状态